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人支氣管上皮細胞 BEAS-2B

 一.產(chǎn)品簡介

1、細胞名稱:BEAS-2B;人支氣管上皮細胞

2、生長特性:貼壁

3、細胞生長條件:

培養(yǎng)條件 DMEM(高糖)+10%FBS+1%雙抗

溫度 37℃

空氣條件 5% CO2,,95% AIR

傳代方法 1:2 傳代,2~3 天換液

凍存條件 90%FBS+10%DMSO

4、背景資料:從一位非癌個體的正常人支氣管上皮病理切片分離出上皮細胞。這些細胞用腺病毒 12-SV40 病毒雜交病毒感染并克隆。DEAS-2B 細胞保留了對血清反應(yīng)進行鱗關(guān)分化的能力,并有用于篩選誘導或影響分化及致癌的化學或生物制劑。細胞角蛋白及 SV40 抗原染色陽性。

二.使用方法

1、您收到細胞后,請按照以下方法進行操作:

取出 25cm2培養(yǎng)瓶,75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶,拆下封口膜,放入 37℃,5%CO2

細胞培養(yǎng)箱中靜置 3-4 小時以穩(wěn)定細胞狀態(tài),然后換用新鮮完全培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)或進行傳代。

2細胞傳代:

1)細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時,棄 25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,用

PBS 清洗細胞一次;2)添加 0.25%胰蛋白酶消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后加入完全培養(yǎng)液終止消化,再輕輕吹打細胞使之脫落,然后將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中,1000rpm 離心 5min;

3)棄上清,沉淀細胞用 12ml 完全培養(yǎng)基重懸,然后按 1:2 比例進行分瓶傳

代,最后放入 37℃,5%CO2 胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

4)待細胞完全貼壁后,觀察培養(yǎng)結(jié)果,之后進行換液培養(yǎng)或傳代。

3細胞凍存:

1)細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時,棄 25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,用

PBS 清洗細胞一次;

2)添加 0.25%胰蛋白酶消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待

細胞回縮變圓后加入完全培養(yǎng)液終止消化,輕輕吹打細胞使之脫落,然后將

懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中,1000rpm 離心 5min;

3)用適量的凍存液(FBSDMSO=9 1)重懸細胞,并放置于凍存管中;

4)先將細胞凍存管放置于-201.5h,然后將其移入-80℃過夜,24h 后轉(zhuǎn)

入液氮中進行長期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80℃。

4、細胞復蘇:

1)從液氮中取出細胞凍存管(注意:佩戴防爆管面具),快速將其置入 37

水浴中解凍,直至凍存管中無結(jié)晶,然后用 75%的酒精擦拭凍存管外壁;

2)將凍存管中的細胞移至含 5ml 完全培養(yǎng)基的 15ml 離心管中, 1000rpm

離心 5min;

3)棄上清,沉淀用 5ml 完全培養(yǎng)基重懸,接種 25cm2培養(yǎng)瓶,于 37℃,5%CO2

細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

4)第二天,換用新鮮完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

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